安捷伦Seahorse XF糖酵解压力测试实验结果解析

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安捷伦Seahorse XF糖酵解压力测试可以直接测量细胞外酸化速率 (ECAR)来评估活细胞糖酵解相对功能,可以获得全面评估糖酵解通路的关键参数,包括:糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备和非糖酵解的酸化。

实验简介:

细胞在无葡萄糖和丙酮酸的糖酵解压力测试检测液中孵育,并测量ECAR获得非糖酵解酸化速率。然后,细胞利用实时加入的葡萄糖并通过糖酵解通路将其分解成丙酮酸,产生ATPNADH、水和质子。质子排出到周围溶液中引起 ECAR快速增加,这种葡萄糖诱导的反应被称为基础条件下的糖酵解速率。再实时加入ATP合酶的抑制剂寡霉素(Oligomycin),可抑制线粒体ATP产生,从而将能量产生转移至糖酵解通路,引起ECAR进一步升高,反映了细胞最大的糖酵解能力。最后加入2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-glucose, 2-DG),该药通过竞争性结合糖酵解途径的己糖激酶而抑制糖酵解,引起ECAR降低从而证实实验中 ECAR的产生来源于糖酵解途径。

实验结果意义:

糖酵解:葡萄糖转变成丙酮酸的过程,XF糖酵解压力测试将糖酵解的测量表示为细胞加入饱和浓度的葡萄糖后所达到的ECAR 速率;

糖酵解能力:测量的是加入寡霉素后细胞达到的最大ECAR速率,寡霉素有效关闭氧化磷酸化并驱使细胞利用糖酵解达到最大能力;

糖酵解储备:该测量表示细胞响应能量需求的能力及细胞糖酵解功能与理论最大值的接近程度;

非糖酵解的酸化:测量其他来源的细胞外酸化,而不是来自糖酵解。

实验结果计算公式:

Seahorse XF糖酵解压力测试通过增加糖酵解活性来检验细胞对挑战性条件做出反应的能力。与终点测定法(例如葡萄糖摄取或乳酸外排)相比,该测定法可在多种条件下提供每个检测样本糖酵解功能的读数,从而获得更丰富的数据。

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

版权说明:版权归原作者及安捷伦细胞团队,本文内容部分来源于美国安捷伦科技公司官网(www.agilent.com)。如有问题请联系小编,欢迎批评指正,衷心感谢!

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2022年4月1日 15:04
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